一、目的：丙酮酸是一種重要的中間代謝物。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)掌握測(cè)定植物組織中丙酮酸含量的原理和方法，增加對(duì)代謝的感性認(rèn)識(shí)。 二、原理：植物樣品組織液用三氯乙酸除去蛋白質(zhì)后，其中所含的丙酮酸可與 2,4- 二硝基苯阱反應(yīng)，生成丙酮酸一 2 ， 4 一二硝基苯蹤，后者在堿性溶液中呈櫻紅色，其顏色深度可用分光光度計(jì)測(cè)量。與同樣處理的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較，即可求得樣品中丙酮酸的含量。 三、儀器、試劑、材料 1、1.5 mol/L NaOH 2、 8% 三氯乙酸 3、 0.1% 2,4 一二硝基苯肼 4 、丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液 5、.材料 大蒜的鱗莖。 四、操作步驟 1、.植物材料提取液的制備 稱(chēng)取 0.5—1g大蒜于研缽內(nèi)加適量 8% 三氯乙酸，仔細(xì)研成勻漿，再用 8% 三氯乙酸洗入 25ml 容量瓶，定容至刻度。塞緊瓶塞，振搖提取，靜置 30min 。取約 10ml 勻漿液離心（ 4000 r/min ） 10min ，上清液備用。 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作（略） 3、.組織液中丙酮酸的測(cè)定 取 1. 0ml 上清液于一刻度試管中，加 2ml 8 ％三氯乙酸，加 1.0ml 0.1％2.4 －二硝基苯肼液，搖勻，再加 5.0 ml 1.5mol/L, NaOH 溶液，搖勻顯色，10min后在 520 nm 波長(zhǎng)下比色，記錄吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得測(cè)定管的丙酮酸含量。 五、結(jié)果處理 丙酮酸含量（mg/g鮮重）=A*V*稀釋倍數(shù)/樣品重(g)*1000 <P>式中， A 為在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得的丙酮酸的微克數(shù)。 V為提取液體積。 六、注意事項(xiàng) 1. 所加試劑的順序不可顛倒，先加丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液或待測(cè)液，再加 8% 三氯乙酸，加 1.5mol/ L NaOH 。 2 .應(yīng)反應(yīng) 10min 后再比色。